Oxidative stress in female dogs with mammary neoplasms

ABSTRACT: The result of the reaction of free radicals with biomolecules is the formation of substances with the potential of inducing oxidative damage, a condition known as oxidative stress. There are voluminous literature data reporting the association, both as a cause and as a consequence, between different diseases and oxidative stress. In this study, 144 female dogs with mammary neoplasia were analyzed. The animals were submitted to clinical evaluation for disease staging, hematological evaluation, serum biochemistry (renal and hepatic function tests), and dosage of the oxidative damage biomarker, malondialdehyde (MDA), at the time of its approach and 30 days after treatment. A control group of 100 healthy animals was also submitted to determination of serum MDA levels. The mean age of the animals affected by mammary neoplasms was 9.88±2.95 (4 to 14) years, while in healthy animals it was 2.31±1.90 years (1 to 6). Of the 144 animals, 113 (78.9%) had malignant neoplasms, and 15, 21, 46, 17 and 14 animals were in clinical stage I, II, III, IV and V respectively and the carcinoma in a mixed tumor was the most frequent histological pattern in this group (26%). Thirty-one animals were diagnosed with benign neoplasms and mammary adenoma was the most frequent histological pattern in 15 animals (51.61%). Hematological changes in the preoperative period were observed in 44 (38.9%) and 12 (38.7%) animals with malignant and benign neoplasias, respectively, and there was a positive correlation between anemia and higher levels of MDA (P=0.0008) for animals with malignant tumors. Regarding serum biochemical parameters, the most frequent alterations in animals with malignant neoplasms were elevated ALT levels in 12 animals (10.6%), creatinine in 10 animals (8.84%) and urea in eight animals (7.07%). Females with benign neoplasms presented less occurrence of changes in these parameters. In the group of healthy animals (control), the mean serum MDA values were 12.08±4.18, whereas in the pre-treatment group, mean MDA was 24.80±5.74 for bitches with benign neoplasms and 32.27±10.24 for bitches with malignant tumors. A significant increase (P 0.001) in MDA levels was observed in animals with malignant mammary neoplasms when compared to healthy animals and with benign tumors. In addition, a significant reduction (P 0.001) was observed 30 days after treatment in MDA levels (27.37±7.86) in animals with malignant tumors. In conclusion, our results indicate an association between MDA seric levels and mammary neoplasms in dogs. The results suggest that this factor can be used as a biomarker of oxidative stress with a potential impact in the prognostic of mammary tumors, since significantly higher levels of MDA were detected especially in dogs carrying malignant tumors and presenting anemia.

RESUMO: O resultado da reação de radicais livres com biomoléculas é a formação de substâncias que podem ser utilizadas como marcadores de dano oxidativo, condição mais conhecida como estresse oxidativo. Evidências científicas comprovam a relação, quer como causa, quer como consequência, entre muitas doenças e o estresse oxidativo. Neste estudo, 144 cadelas portadoras de neoplasia de mama, foram submetidas à avaliação clínica para estadiamento da doença, avaliação hematológica, testes de função renal e hepática e dosagem do biomarcador de dano oxidativo, malondialdeído (MDA), no momento de sua abordagem e 30 dias após realização de tratamento. Um grupo controle de 100 cadelas saudáveis foi submetido também à determinação dos níveis séricos de MDA. A idade média dos animais acometidos por neoplasias mamárias foi de 9,88±2,95 (4 a 14) anos, enquanto que nos animais saudáveis foi de 2,31±1,90 anos (1 a 6). Dos 144 animais, 113 (78, 9%) apresentavam neoplasias malignas, sendo que 15, 21, 46, 17 e 14 animais encontravam-se em estadiamento clínico I, II, III, IV e V respectivamente, e o carcinoma em tumor misto foi o padrão histológico mais frequente neste grupo (26%). Trinta e um animais tiveram diagnóstico de neoplasias benignas, sendo que 7 estavam no estádio I, 16 no estádio II e 8 no estádio III e o adenoma mamário foi o padrão histológico mais frequente em 15 animais (51,61%). Alterações hematológicas no período pré-operatório foram observadas em 44 (38,9%) e 12 (38,7%) animais portadores de neoplasias malignas e benignas, respectivamente, sendo que houve correlação positiva entre anemia e níveis mais elevados de MDA (P=0,0008), para os animais com tumores malignos. Em relação aos parâmetros bioquímicos séricos, as alterações mais frequentes nos animais com neoplasias malignas foram a elevação dos níveis de ALT em 12 animais (10,6%), de creatinina em 10 animais (8,84%) e de ureia em oito animais (7,07%) Cadelas portadoras de neoplasias benignas apresentaram menor ocorrência de alterações nesses parâmetros. No grupo controle, a média dos valores séricos de MDA foi 12,08±4,18, enquanto que no grupo pré-tratamento, a média de MDA foi de 24,80±5,74 para as cadelas com neoplasia benigna e 32,27±10,24 para as neoplasias malignas. Verificou-se aumento significativo do valor sérico de MDA em cadelas portadoras de neoplasias malignas em comparação com os animais hígidos ou com neoplasias benignas (P 0,001). Ainda, 30 dias após o tratamento observou-se uma diminuição significativa (P 0,001) no valor médio de MDA (27,37±7,86) nos animais com neoplasias malignas. Em conclusão, os resultados deste estudo evidenciam uma associação entre níveis séricos aumentados de MDA e presença de neoplasias mamárias em cadelas. Os resultados sugerem que este fator pode ser utilizado como biomarcador de estresse oxidativo em cães, com provável impacto no prognóstico dos tumores mamários, uma vez que níveis significativamente mais altos de MDA foram detectados especialmente nas cadelas portadoras de tumores malignos e apresentando anemia.

Oxidative stress in female dogs with mammary neoplasms / Estresse oxidativo em cadelas com neoplasia mamária

The result of the reaction of free radicals with biomolecules is the formation of substances with the potential of inducing oxidative damage, a condition known as oxidative stress. There are voluminous literature data reporting the association, both as a cause and as a consequence, between different diseases and oxidative stress. In this study, 144 female dogs with mammary neoplasia were analyzed. The animals were submitted to clinical evaluation for disease staging, hematological evaluation, serum biochemistry (renal and hepatic function tests), and dosage of the oxidative damage biomarker, malondialdehyde (MDA), at the time of its approach and 30 days after treatment. A control group of 100 healthy animals was also submitted to determination of serum MDA levels. The mean age of the animals affected by mammary neoplasms was 9.88±2.95 (4 to 14) years, while in healthy animals it was 2.31±1.90 years (1 to 6). Of the 144 animals, 113 (78.9%) had malignant neoplasms, and 15, 21, 46, 17 and 14 animals were in clinical stage I, II, III, IV and V respectively and the carcinoma in a mixed tumor was the most frequent histological pattern in this group (26%). Thirty-one animals were diagnosed with benign neoplasms and mammary adenoma was the most frequent histological pattern in 15 animals (51.61%). Hematological changes in the preoperative period were observed in 44 (38.9%) and 12 (38.7%) animals with malignant and benign neoplasias, respectively, and there was a positive correlation between anemia and higher levels of MDA (P=0.0008) for animals with malignant tumors. Regarding serum biochemical parameters, the most frequent alterations in animals with malignant neoplasms were elevated ALT levels in 12 animals (10.6%), creatinine in 10 animals (8.84%) and urea in eight animals (7.07%). Females with benign neoplasms presented less occurrence of changes in these parameters. In the group of healthy animals (control), the mean serum MDA values were 12.08±4.18, whereas in the pre-treatment group, mean MDA was 24.80±5.74 for bitches with benign neoplasms and 32.27±10.24 for bitches with malignant tumors. A significant increase (P<0.001) in MDA levels was observed in animals with malignant mammary neoplasms when compared to healthy animals and with benign tumors. In addition, a significant reduction (P<0.001) was observed 30 days after treatment in MDA levels (27.37±7.86) in animals with malignant tumors. In conclusion, our results indicate an association between MDA seric levels and mammary neoplasms in dogs. The results suggest that this factor can be used as a biomarker of oxidative stress with a potential impact in the prognostic of mammary tumors, since significantly higher levels of MDA were detected especially in dogs carrying malignant tumors and presenting anemia.(AU)

O resultado da reação de radicais livres com biomoléculas é a formação de substâncias que podem ser utilizadas como marcadores de dano oxidativo, condição mais conhecida como estresse oxidativo. Evidências científicas comprovam a relação, quer como causa, quer como consequência, entre muitas doenças e o estresse oxidativo. Neste estudo, 144 cadelas portadoras de neoplasia de mama, foram submetidas à avaliação clínica para estadiamento da doença, avaliação hematológica, testes de função renal e hepática e dosagem do biomarcador de dano oxidativo, malondialdeído (MDA), no momento de sua abordagem e 30 dias após realização de tratamento. Um grupo controle de 100 cadelas saudáveis foi submetido também à determinação dos níveis séricos de MDA. A idade média dos animais acometidos por neoplasias mamárias foi de 9,88±2,95 (4 a 14) anos, enquanto que nos animais saudáveis foi de 2,31±1,90 anos (1 a 6). Dos 144 animais, 113 (78, 9%) apresentavam neoplasias malignas, sendo que 15, 21, 46, 17 e 14 animais encontravam-se em estadiamento clínico I, II, III, IV e V respectivamente, e o carcinoma em tumor misto foi o padrão histológico mais frequente neste grupo (26%). Trinta e um animais tiveram diagnóstico de neoplasias benignas, sendo que 7 estavam no estádio I, 16 no estádio II e 8 no estádio III e o adenoma mamário foi o padrão histológico mais frequente em 15 animais (51,61%). Alterações hematológicas no período pré-operatório foram observadas em 44 (38,9%) e 12 (38,7%) animais portadores de neoplasias malignas e benignas, respectivamente, sendo que houve correlação positiva entre anemia e níveis mais elevados de MDA (P=0,0008), para os animais com tumores malignos. Em relação aos parâmetros bioquímicos séricos, as alterações mais frequentes nos animais com neoplasias malignas foram a elevação dos níveis de ALT em 12 animais (10,6%), de creatinina em 10 animais (8,84%) e de ureia em oito animais (7,07%) Cadelas portadoras de neoplasias benignas apresentaram menor ocorrência de alterações nesses parâmetros. No grupo controle, a média dos valores séricos de MDA foi 12,08±4,18, enquanto que no grupo pré-tratamento, a média de MDA foi de 24,80±5,74 para as cadelas com neoplasia benigna e 32,27±10,24 para as neoplasias malignas. Verificou-se aumento significativo do valor sérico de MDA em cadelas portadoras de neoplasias malignas em comparação com os animais hígidos ou com neoplasias benignas (P<0,001). Ainda, 30 dias após o tratamento observou-se uma diminuição significativa (P<0,001) no valor médio de MDA (27,37±7,86) nos animais com neoplasias malignas. Em conclusão, os resultados deste estudo evidenciam uma associação entre níveis séricos aumentados de MDA e presença de neoplasias mamárias em cadelas. Os resultados sugerem que este fator pode ser utilizado como biomarcador de estresse oxidativo em cães, com provável impacto no prognóstico dos tumores mamários, uma vez que níveis significativamente mais altos de MDA foram detectados especialmente nas cadelas portadoras de tumores malignos e apresentando anemia.(AU)

Molecular identification and histological aspects of Renicola sloanei (Digenea: Renicolidae) in Puffinus puffinus (Procellariiformes): a first record / Identificação molecular e aspectos histológicos de Renicola sloanei (Digenea: Renicolidae) em Puffinus puffinus (Procellariiformes): primeiros registros

Abstract Renicolids are parasites that inhabit the renal tubules and ureters of molluscivorous and piscivorous birds. Puffinus puffinus is a migratory seabird that was identified as the definitive host of Renicola spp. Studies focusing on the renicolid species and the resulting renal lesions are valuable for their association with causes of stranding in seabirds. The aim of this study was to identify the renicolid trematodes and evaluate the histological findings in two P. puffinus stranded on the coast of Paraná state, Brazil. The parasites were evaluated by histologic, ultrastructural and molecular assays, while tissue changes were analyzed by histologic methods. The morphological and morphometrical characteristics of the parasites, along with polymerase chain reaction and sequencing assays (ribosomal and mitochondrial regions), identified the species as Renicola sloanei. The results also suggest that this helminth can be the adult form of Cercaria pythionike. The dilation of collecting ducts was the main histological finding in the kidneys. In conclusion, R. sloanei was identified, and for the first time, P. puffinus was described as a host of this digenean inducing mild renal changes.

Resumo Renicolídeos são parasitos que habitam túbulos renais e ureteres de aves que se alimentam de moluscos e peixes. Puffinus puffinus, ave marinha migratória, foi registrada como hospedeiro definitivo de Renicola spp. Estudos relacionados com as espécies de renicolídeos e as lesões renais resultantes são importantes para o entendimento das causas de óbito de aves marinhas. O objetivo deste estudo foi identificar os trematódeos renicolídeos e avaliar os achados histológicos em dois P. puffinus encalhados no litoral do Estado do Paraná, Brasil. Os parasitos foram avaliados por ensaios histológicos, ultraestruturais e moleculares, enquanto as alterações teciduais foram analisadas por métodos histológicos. As características morfológicas e morfométricas dos parasitos, juntamente com a reação em cadeia da polimerase e sequenciamento (regiões ribossomal e mitocondrial), identificaram a espécie como Renicola sloanei. Os resultados também sugerem que este helminto pode ser a forma adulta de Cercaria pythionike. A dilatação dos ductos coletores foi o principal achado histológico renal. Em conclusão, R. sloanei foi identificado, e pela primeira vez P. puffinus foi descrito como hospedeiro deste digenético induzindo alterações renais discretas.

Diagnóstico diferencial das doenças neurológicas dos bovinos no estado do Paraná / Differential diagnosis of neurologic diseases of cattle in the state of Paraná

O objetivo deste trabalho foi identificar as doenças neurológicas que acometeram bovinos no estado do Paraná entre os anos de 2009 e 2015. A investigação aconteceu, preferencialmente, nas propriedades rurais onde os casos ocorreram. Foram registradas as informações sobre a evolução das doenças nos bovinos afetados do rebanho, e os prováveis fatores de risco foram identificados. Todos os procedimentos de exame físico geral e neurológico foram realizados sistematicamente para a caracterização da síndrome neurológica presente. Amostras de sangue e de líquor foram colhidas para a realização de exames laboratoriais. De acordo com o tempo de evolução e com a gravidade dos sinais clínicos observados, os bovinos doentes eram mantidos vivos para acompanhamento da evolução ou da resposta ao tratamento, ou eram submetidos à eutanásia seguida de necropsia. Fragmentos do sistema nervoso e dos demais órgãos foram colhidos para exame histopatológico. O exame de imunofluorescência direta e a prova biológica em camundongos foram realizados em todos os bovinos que morreram, com a finalidade de confirmar ou descartar o diagnóstico de raiva. Métodos laboratoriais específicos das rotinas de virologia, bacteriologia e toxicologia foram empregados, como complementares, para o estabelecimento do diagnóstico diferencial. Foram investigados 236 bovinos com doença neurológica, sendo 85 casos de ocorrência individual e 151 casos distribuídos por surtos que ocorreram em 79 rebanhos. As encefalopatias (180/236; 76,2%) predominaram sobre as mielopatias (27/236; 11,4%). As doenças inflamatórias determinadas por infecções (98/236; 41,5%) e as doenças tóxicas (91/236; 38,6%) foram as principais, enquanto as causas degenerativas (10/236; 4,2%), metabólicas (9/236; 3,8%), físicas (9/236; 3,8%), neoplásicas (4/236; 1,7%), e os defeitos congênitos (1/236; 0,4%) ocorreram menos frequentemente. Os casos inconclusivos somaram 5,9% (14/236). A meningoencefalite por BoHV-5 e a raiva foram as doenças de frequência maior e podem ser consideradas as mais importantes. Dentre as causas tóxicas, as intoxicações por plantas se destacaram (63/91; 69,2%) e foram responsáveis por 26,6% de todos os casos. Destacaram-se ainda a polioencefalomalácia, a meningoencefalite trombótica por Histophilus somni e o botulismo. Essas informações contribuem para que os médicos veterinários adotem condutas mais efetivas de diagnóstico e de prevenção, e são valiosas para o sistema oficial de vigilância epidemiológica do estado.(AU)

The aim of this study was to identify the neurological diseases that affected cattle in Paraná state between the years 2009 and 2015. The investigation took place, preferably, in the farms where cases occurred. Information on the evolution of the diseases in the affected cattle of the herd was recorded, and the probable risk factors were identified. All general and neurological examination procedures were performed systematically for the characterization of the neurological syndrome in each case. Samples of blood and CSF for laboratory exams were also collected. According to the evolution features and the severity of the observed clinical signs, the diseased cattle were kept alive to follow the progress of the disease, or were submitted to euthanasia followed by necropsy. Fragments of tissues from nervous system and other organs were collected for histopathological examination. Direct immunofluorescence test and biological test were performed on all the cattle that died, in order to confirm or rule out the diagnosis of rabies. Specific virology, bacteriology and toxicology laboratory methods were used as complementary exams in order to establish differential diagnosis. A total of 236 cattle with neurological disease were investigated, 85 cases of individual occurrence and 151 cases distributed by outbreaks that occurred in 79 herds. Encephalopathies (180/236, 76.2%) predominated over mielopathies (27/236, 11.4%). Inflammatory diseases caused by infections (98/236, 41.5%) and the toxic diseases (91/236, 38.6%) were the main causes, while degenerative (10/236, 4.2%), metabolic (9/236; 3.8%), physical (9/236, 3.8%), neoplastic (4/236, 1.7%), and congenital defects (1/236, 0.4%) occurred less often. The inconclusive cases were 5.9% (14/236). BoHV-5 meningoencephalitis and rabies were diseases of higher frequency and may be considered the most important. Among the toxic causes, plant poisonings were highlighted (63/91, 69.2%) and were responsible for 26.6% of all cases. Polioencephalomalacia, thrombotic meningoencephalitis caused by Histophilus somni and botulism were also highlighted. This information helps veterinarians to adopt more effective diagnostic and preventive approaches and is valuable to the state's official epidemiological surveillance system.(AU)

Meningiomas em cães: aspectos clínicos, histopatológicos e imuno-histoquímicos / Meningiomas in dogs: clinical, histopathological and immunohistochemical aspects

As neoplasias no sistema nervoso central (SNC) de animais de companhia são frequentemente diagnosticadas, no entanto dados sobre prevalência são escassos. O objetivo deste estudo foi avaliar retrospectivamente a ocorrência de neoplasias primárias de SNC em cães atendidos em um Hospital-Escola Veterinário e descrever aspectos clínicos, histopatológicos e imuno-histoquímicos dos tumores mais frequentes. Quatorze casos (prevalência de 0,27%) de neoplasias primárias de SNC foram identificados no período de 1998 a 2013 e destes, 11 tiveram o diagnóstico de meningiomas. A idade média dos animais com meningioma foi 10 anos, sendo machos (7/11) e a raça Boxer (3/11) os mais afetados. Sete meningiomas eram espinhais e quatro intracranianos, sendo os principais sinais clínicos alteração na locomoção e convulsões, respectivamente. Metástase pulmonar ocorreu em dois casos. Em seis animais com meningioma espinhal foi realizada a mielografia, sendo que em um também foi realizada a tomografia. Em todos os casos os exames foram efetivos na visualização de desvio ou interrupção da coluna de contraste, com alterações sugestivas da presença de massa. Em cinco animais realizou-se cirurgia exploratória visando a confirmação da suspeita clínica ou retirada da massa, sendo que a sobrevida variou de 85 a 960 dias. Na avaliação histopatológica, os meningiomas foram classificados em transicional (4/11), meningotelial (2/11), papilar (2/11), angiomatoso (1/11), microcístico (1/11) e anaplásico (1/11). Destes, oito (8/11) apresentaram marcação positiva para tricrômio de Masson e um para vermelho congo nas técnicas histoquímicas. No painel imuno-histoquímico, todos os casos apresentaram imunomarcação positiva para vimentina, mas imunomarcação negativa para fator VIII e p53. A imunomarcação para S100 (6/11), GFAP (5/11) e pancitoqueratina (3/11) foi de intensidade variável. Na graduação histológica, dez meningiomas eram grau I e um grau III. O índice médio de proliferação...

Neoplasias of the central nervous system (CNS) of small animals are frequently diagnosed; however, data relative to prevalence are scarce. The aim of this study was to evaluate retrospectively the occurrence of primary CNS tumors in dogs in a Veterinary Teaching Hospital and describe clinical, histopathological and immunohistochemical aspects of the most common tumors. Fourteen cases of CNS primary neoplasia (prevalence of 0.27%) were identified from 1998 to 2013; from these 11 were diagnosed as meningiomas. The mean age of dogs with meningiomas was 10 years; male (7/11) and the Boxer breed (3/11) were most commonly represented. Seven meningiomas were located in the spinal cord and four intracranially; the main clinical signs were impaired locomotion and seizures, respectively. Pulmonary metastasis was found in two cases. Myelography was performed in six dogs with spinal meningiomas. In these cases it was effective in demonstrating the deviation or interruption of the contrast column. Exploratory surgery to confirm diagnosis or remove the tumor was performed in five animals and the survival rate varies 85 to 960 days. Meningiomas were histologically classified as transitional (4/11), meningothelial (2/11), papillary (2/11), angiomatous (1/11), microcystic (1/11) and anaplastic (1/11). Evaluation of histological grade was performed; 10 meningiomas were classified as grade I and one as grade III. The neoplastic cells of eight tumors (8/11) were positive for Masson's trichrome and one with the Congo red histochemical techniques. The immunohistochemical assays revealed in all tumors a positive immunoreactivity for vimentin but negative staining for factor VIII and p53. Immunolabelling for S100 (6/11), GFAP (5/11) and pancytokeratin (3/11) showed a variable staining intensity. The mean cell proliferation index was 3.2 mitotic figures and 3.4% for Ki-67 immunostaining. The results confirmed that meningiomas are the most frequent primary CNS neoplasia...

Histophilus somni-induced thrombotic meningoencephalitis in cattle from northern Paraná, Brazil / Meningoencefalite trombótica-induzida por Histophilus somni em bovinos da região norte do Paraná

Thrombotic meningoencephalitis (TME) is a fatal neurological disease of cattle, predominantly from North America, that is caused by Histophilus somni with sporadic descriptions from other countries. This manuscript describes the occurrence of spontaneous TME in cattle from northern Paraná, Brazil. Most cattle had acute neurological manifestations characteristic of brain dysfunction. Hematological and cerebrospinal fluid analyses were not suggestive of bacterial infections of the brain. Histopathology revealed meningoencephalitis with vasculitis and thrombosis of small vessels that contained discrete neutrophilic and/or lymphocytic infiltrates admixed with fibrin at the brainstem, cerebral cortex, and trigeminal nerve ganglion of all animals. All tissues from the central nervous system used during this study were previously characterized as negative for rabies virus by the direct immunofluorescence assay. PCR and RT-PCR assays investigated the participation of infectious agents associated with bovine neurological disease by targeting specific genes of H. somni, Listeria monocytogenes, bovine herpesvirus -1 and -5, bovine viral diarrhea virus, and ovine herpesvirus-2. PCR and subsequent sequencing resulted in partial fragments of the 16S rRNA gene of H. somni from brain sections of all animals with histopathological diagnosis of TME; all other PCR/RT-PCR assays were negative. These findings confirmed the participation of H. somni in the neuropathological disease observed in these animals, extend the geographical distribution of this disease, and support previous findings of H. somni from Brazil.(AU)

Meningoencefalite trombótica (Thrombotic meningoencephalitis- TME) é uma doença neurológica fatal de bovinos ocasionada por Histophilus somni. A infecção tem sido descrita predominantemente na América do Norte e de forma esporádica em outros países. O objetivo deste estudo é relatar a ocorrência de TME em bovinos da região norte do estado do Paraná, Brasil. A maioria dos animais apresentaram sinais clínicos neurológicos característicos de disfunção cerebral aguda. Análises hematológicas e do fluido cerebrospinal não foram sugestivas de infecção bacteriana do cérebro. A histopatologia revelou meningoencefalite com vasculite e trombose de pequenos vasos com discreto infiltrado neutrofílico e/ou linfocítico mesclada com fibrina no tronco e córtex cerebral e no gânglio do nervo trigêmio de todos os animais. As amostras de sistema nervoso central incluídas nesse estudo foram previamente caracterizadas como negativas para raiva por meio de técnica de imunofluorescência direta. A participação de agentes infecciosos associados à doença neurológica em bovinos foi avaliada por técnicas moleculares como PCR e RT-PCR para amplificação parcial de genes de H. somni, Listeria monocytogenes, herpesvírus bovino 1 e 5, vírus da diarreia viral bovina e herpesvírus ovino 2. As seções do cérebro de todos os animais com diagnóstico histopatológico de TME foram positivas em PCR para a detecção do gene 16S rRNA de H. somni. O sequenciamento dos produtos amplificados confirmou a presença de DNA de H. somni nos fragmentos de cérebro avaliados. As reações de PCR/RT-PCR para todos os outros micro-organismos avaliados resultaram negativas. Os resultados desse estudo confirmaram a participação do H. somni nos episódios de doença neurológica observada nos animais avaliados, amplia a distribuição geográfica da TME e ratifica estudos prévios realizados no Brasil que demonstraram a presença de H. somni em outras formas de manifestação clínica das infecções por essa bactéria.(AU)

Hemangiopericytoma in a female dog with direct invasion of abdominal cavity and pulmonary metastasis / Hemangiopericitoma em uma cadela com invasão direta da cavidade abdominal e metástase pulmonar

An intact adult female Poodle dog was presented with a history of an increase in volume in the left and right mammary inguinal glands. The histopathological examination revealed a proliferation of spindle cells arranged in bundles with concentric arrangements surrounding blood vessels, occasionally collapsed. Three weeks after the surgery, the animal presented a recurrence of the tumor that extended from the left inguinal mammary gland to the vulva. Necropsy revealed direct invasion of the abdominal cavity by the tumor and pulmonary metastasis. The definitive diagnosis of hemangiopericytoma was made by histopathological and immunohistochemical examination. Pulmonary metastasis of CHP (canine hemangiopericytoma) is rare and there is no previous report of direct invasion to the abdominal cavity as observed in the present case.

Uma cadela adulta, intacta, da raça Poodle, apresentou histórico de aumento de volume na mama inguinal direita. O exame histopatológico revelou proliferação de células fusiformes dispostas em bandas e arranjos concêntricos ao redor de vasos, os quais se apresentavam ocasionalmente colapsados. Três semanas após a cirurgia, o animal apresentou recorrência do tumor que se estendia até a vulva. No exame necroscópico, observou-se que a massa invadia a cavidade abdominal e presença de metástase no pulmão. O diagnóstico definitivo de hemangiopericitoma foi realizado por meio dos exames histopatológico e imuno-histoquímico. A metástase pulmonar do hemangiopericitoma canino é rara e não há relatos prévios de invasão direta para cavidade abdominal, como observado no presente caso.

Intoxicação espontânea de bovinos por Senna obtusifolia no Estado do Paraná / Spontaneous Senna obtusifolia poisoning in cattle in the state of Parana, Brazil

Plantas do gênero Senna causam miopatia degenerativa em bovinos e o maior número de relatos envolve Senna occidentalis. O objetivo desse trabalho é relatar, pela segunda vez no Brasil, um surto de intoxicação natural por Senna obtusifolia. É descrito um surto de intoxicação por Senna obtusifolia, na região noroeste do estado do Paraná, que aconteceu em um lote de 200 vacas, com idade entre 45 e 152 meses, introduzidas em um confinamento para melhorar a condição corporal antes do parto. A área do confinamento estava invadida pela planta e as vacas permaneceram no local durante oito dias. Entre quatro e nove dias após a entrada no confinamento 20 vacas adoeceram e somente uma se recuperou. Os sinais consistiram em mioglobinúria, incoordenação e decúbito esternal permanente. As vacas doentes apresentaram aumento das atividades das enzimas creatina quinase, aspartato aminotransferase, gamaglutamiltransferase e fosfatase alcalina. Lesões na musculatura esquelética dos membros posteriores caracterizadas por áreas pálidas representaram as principais alterações observadas à necropsia de quatro bovinos. Necrose segmentar multifocal da musculatura esquelética e necrose paracentral multifocal no fígado foram as alterações histopatológicas mais relevantes. As evidências epidemiológicas, clínicas e patológicas indicam o diagnóstico de intoxicação por Senna obtusifolia. A planta demonstrou ter efeito miotóxico e hepatotóxico nos animais intoxicados e a doença foi quase sempre fatal.

Plants of the genus Senna cause a degenerative myopathy in cattle and most of the reports refer to Senna occidentalis. The aim of this paper is to report, for the second time in Brazil, an outbreak of natural poisoning by Senna obtusifolia. It happened in the northwestern Paraná in a herd of 200 cows, 45 to 152 months of age, which had been placed into a feedlot to improve their nutritional status before the calving period. The cows stayed for eight days in this feedlot infested by the plant. Four to nine days after they got into the feedlot, 20 cows became ill and only one recovered. The clinical signs consisted of myoglobinuria, incoordination and permanent sternal recumbency. The affected cows showed increased activity of creatine phosphokinase, aspartate aminotransferase, gama-glutamyltransferase, and alkaline phosphatase. The main postmortem changes were in skeletal muscles of the hind limbs characterized by pale areas. The histological alterations were multifocal segmental necrosis of skeletal muscles and hepatic multifocal paracentral necrosis. Epidemiological, clinical and pathological data led to the diagnosis of Senna obtusifolia poisoning. The plant showed miotoxic and hepatotoxic effects on the poisoned animals and the disease was almost always lethal.

Biomonitoring of microcystin and aflatoxin co-occurrence in aquaculture using immunohistochemistry and genotoxicity assays

This work investigated the effects of co-occurring aflatoxin B1 (AFB1) and microcystin (MC) in aquaculture, using immunohistochemistry and genotoxicity methods. Tilapia (Oreochromis niloticus) were exposed to AFB1 by intraperitoneal and MC (cell extract of Microcystis aeruginosa) by intraperitoneal and immersion routes. The interaction of MC-AFB1 was evaluated co-exposing the intraperitoneal doses. Blood samples were collected after 8, 24, and 48h to analyze the micronucleus frequency and comet score. The interaction of MC-AFB1 showed a synergic mutagenic response by higher micronucleus frequency of co-exposed group. A slight genotoxic synergism was also observed in the comet score. Immunohistochemistry detected MC in al lthe fish liver tissues exposed to MC by intraperitoneal route, and only the immersed group with the highest dose of MC showed a positive response. Although MC was non-detectable in the edible muscle, the combination of immunohistochemistry with genotoxicity assay was an attractive biomonitoring tool in aquaculture, where the animals were frequently exposed to co-occurring synergic hazards.

Gastric Helicobacter spp. infection in captive neotropical Brazilian feline

Ten captive neotropical Brazilian feline were submitted to gastroscopic examination and samples of gastric mucosa from fundus, corpus and pyloric antrum were evaluated for the presence of Helicobacter species. Warthin-Starry (WS) staining and PCR assay with species-specific primers and enzymatic cleavage were applied for bacterial detection and identification. Histological lesions were evaluated by haematoxylin and eosin staining. All animals showed normal gross aspect of gastric mucosa. Helicobacter heilmannii was confirmed in 100 percent of the samples by WS and PCR assay. Mild lymphocytic infiltrate in the lamina propria was observed in eight animals, mainly in the fundus region. Small lymphoid follicles were seen in three animals. No significant association between Helicobacter infection and histological findings was verified. These observations suggest that gastric Helicobacter spp. could be a commensal or a eventual pathogen to captive neotropical feline, and that procedures, way life, and stress level on the shelter apparently had no negative repercussion over the integrity of the stomach.

Aortic body tumors in dogs from Northern Paraná, Brazil / Tumores do corpo aórtico em cães do Norte do Paraná, Brasil

This article describes the occurrence of aortic body tumors in four dogs from Southern Brazil. All dogs were males, more than 9 year of age; most of these were from the Boxer breed of dogs. The animals had large neoplastic growths at the base of the heart, which demonstrated histologic characteristics consistent with that of aortic body tumor. By immunohistochemistry, tissue sections from all dogs reacted positively to neuron specific enolase. These cases might represent the first description of this tumor in dogs from Brazil, as confirmed by immunohistochemistry.

Este artigo descreve a occorência de tumores do corpo aórtico em quatro cães provenientes do Sul do Brasil. Todos os cães eram machos com mais de 9 anos de idade; a maioria deles era da raça Boxer. Os animais tiveram crescimentos neoplásticos grandes na base do coração, os quais demonstraram característicias histológicas consistentes com o tumor aórtico. Através da imunohistoquímica, cortes de tecidos de todos os animais eram positivos para enolase neuronal especifica. Esses casos provavalmente representam à primeira descrição desse tumor em cães do Brasil, os quias foram confirmados por imunoistoquímica.

Imunoistoquímica: detecção de microcistina em tilápia exposta ao extrato de Microcystis aeruginosa (Cyanobacteria) / Imunohistochemistry: detection of microcystin in tilápia exposed to Microcystis aeruginosa (Cyanobacteria) extract

A deterioração da qualidade de água pela piscicultura associa-se à eutrofização, com florescimento de cianobactérias. Microcystis aeruginosa destaca-se como principal produtora de microcistinas (MCs), grupo de hepatotoxinas com potencial promotor de tumor. No presente trabalho desenvolveu-se método imunoistoquímico para a detecção de MC em tilápias (Oreochromis niloticus) submetidas à injeção intraperitoneal (i.p.) ou imersão em extrato de M. aeruginosa BCCBUSP 262, empregando anticorpo monoclonal anti-MC (M8H5) e sistema polímero-peroxidase. As tilápias (N=42) foram submetidas a sete tratamentos, sendo três grupos inoculados i.p. com 2,0x105, 4,0x105 e 1,0x106 cels.Kg-1 de M. aeruginosa BCCBUSP 262 e quatro submetidos à imersão em diferentes concentrações do extrato da cianobactéria (variando de 1,0x104 a 1,0x105cel.mL-1). Analisando fígado e tecido muscular pelo ensaio imunoistoquímico, não se detectou marcação em tecido muscular. Todos os animais inoculados i.p. apresentaram marcação positiva para MC no fígado, mas em teste de imersão, apenas os expostos a maior dose (1,0x105 cels.mL- 1) apresentaram marcação positiva. Embora MC não seja detectada em tecido muscular, assim como no fígado de animais imersos em extrato de M. aeruginosa CCBUSP 262 em concentrações menores que 1,0x105 cels.mL-1, os resultados constituíram-se base para o desenvolvimento metodológico objetivando a aplicação da imunoistoquímica no diagnóstico rápido no controle de qualidade de pescados.

The deterioration of the water quality due to aquaculture is associated with eutrophication, with bloom of cyanobacteria. Microcystis aeruginosa is distinguished as main producer of microcystins (MCs), group of hepatotoxins with tumor promoter potential. In the present work immunohistochemical method for detection of MC in tilápia (Oreochromis niloticus), fish submitted to intraperitoneal injection (i.p.) or immersion in extract of M. aeruginosa BCCBUSP 262 was developed, using monoclonal antibody anti- MC (M8H5) and polymer peroxidase system. The tilápias (N=42) had been submitted to the seven treatments, three groups inoculated i.p. with 2.0x105, 4.0x105 and 1.0x106 cells. Kg-1 of M. aeruginosa BCCBUSP 262 and four groups exposed to the immersion in different extract concentrations of cyanobacterium. Analyzing liver and muscular tissue for immunohistochemical assay, muscular tissue was not stained. All the animals inoculated i.p. presented positive marking for MC in the liver, but in immersion test, only the ones exposed in the highest dose (1,0x105 cels.mL-1) presented positive marking. Although MC was not detected in muscular tissue, as well as in the liver of animals immersed in extract of M. aeruginosa BCCBUSP 262 in concentrations less than 1.0x105 cels.mL-1, the results would constitute in the base for the methodological development aiming the application of the immunohistochemistry in the rapid diagnosis in quality control of fish.

Estudo retrospectivo de linfoma canino no período de 1990 - 2004 na região norte do Paraná / Retrospective study of canine lymphoma in period 1990 - 2004, north region the of Paraná

O linfoma canino é a principal neoplasia de origem hemolinfática. Foram analisados 186 casos de linfoma diagnosticados entre 1990 a 2004. Observou-se que cães machos apresentaram uma ocorrência maior (58,6%) do que em fêmeas (41,4%). A idade média dos animais acometidos foi de 5,9 anos. As maiores ocorrências do linfoma foram observadas em cães sem raça definida (40,3 %), Pastor Alemão (8,6%), Rottweiler (8,1%) e Boxer (7,0%). Quanto à classificação anatômica e estadiamento clínico, a maior ocorrência foi a da forma multicêntrica(68,8%) e os estádios III (37,1%) e IV (43,5%), respectivamente.

Canine malignant lymphoma (CML) is a common lymphoid tumor.Canine lymphomas from 1990 to 2004 (n=186) were analyzed onepidemiological aspects. The occurrence of CML in males ( 58,6%)was greater than in females (41,4%). The middle age of affected dogs was 5,9 years. The most common breeds in this study were mixedbreed (40,3%), German Sheepdog (8,6%), Rottweiler (8,1%) and Boxer (7,0%). For the anatomical classification and the clinical stagingof CML, the most common were multicentric form (68,8%) andstage III (37,1%) and IV (43,5%), respectively.

Linfoma canino de células T: aspectos epidemiológicos, clínicos e morfológicos de 38 casos / Canine T - cell lymphoma: a morphological, epidemiologic and clinical study of 38 cases

O objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência e aspectos clínicos,morfológicos e imunoistoquímicos de linfomas caninos de células T.Foram avaliados 71 cães com linfoma, dos quais 38 foram classificadosimunoistoquimicamente como células T. Conforme a classificação daWorking Formulation e Kiel 18 foram classificados como grauintermediário de malignidade, 15 de alta malignidade e 5 de baixamalignidade. O padrão de proliferação linfomatoso foi difuso emtodos os animais (38). O linfoma de células T foi mais comum emcães de raça definida (24/38), como Boxer, Cocker Spaniel Inglês eRottweiler. A ocorrência de linfoma T em machos (21/38) foi maiordo que em fêmeas e a idade média foi de 5,8 anos (1-13 anos). Quantoà classificação anatômica e estadiamento clínico do linfoma de célulasT, a forma multicêntrica (29/38) foi a mais comum e os estádios IV (15/38) e III (14/38), respectivamente.

The aim of this study was to evaluate the incident and clinical,morphological and immunological aspects of canine T-celllymphomas. From 71 canine lymphomas, 38 were classified byimmunohistochemistry as T-cell lymphomas. According to theWorking Formulation and Kiel classification, 18 were classified asintermediate-grade, 15 as high-grade and 5 as low-grade. The patternof lymphomatous proliferation was diffuse in all 38 animals. T-celllymphoma was more common in defined breeds (24/38), such asBoxers, English Cockers and Rottweilers. The occurrence of T-celllymphoma in males (21/38) was greater than in females and themedian age was 5.8 years (1 to 13 years). For the anatomical classificationand the clinical staging of T-cell lymphomas, the most common weremulticentric form (29/38) and stage IV (15/38) and III (14/38), respectively.

Lesões gástricas em suínos: Ocorrência e relação com o gênero, peso ao abate e presença de helicobacter spp.1 / Gastric lesions in swine: occurrence and correlation with sex, weight and helicobacter spp infection

O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de lesões gástricas em suínos de abate e verificar a relação das lesões com o gênero, o peso da carcaça e a presença de Helicobacter spp na mucosa gástrica. Foram colhidos e examinados 236 estômagos de suínos. As lesões da pars esophagea e região glandular foram classificadas conforme a severidade em graus 0, 1, 2 e 3. Fragmentos das regiões aglandular e glandular foram processados para exame histológico e para pesquisa de Helicobacter spp. A análise macroscópia reveleu que 203 (86.1) estômagos apresentavam algum tipo de lesão. A ocorrência de erosões e úlceras na região aglandular foi observada em 104 (44.1) animais e na região glandular em 22 (9.3). A ulceração na região gastroesofágica estava presente em 45 animais (19.1), dos quais 25 (21.1) eram machos e 20 (16.5) fêmeas. O peso médio da carcaça foi de 82.7 kg nos animais sem lesões e com paraqueratose na pars esophagea e de 79.5 Kg nos animais com erosões e ulcerações. Utilizando a coloração de Warthin-Starry, observamos Helicobacter spp na mucosa gástrica de 112 (47.5) amostras. Destas, 54 (48.2) foram classificadas como grau 2 ou 3 (pars esophagea) e 58 (51.8) como grau 0 e 1. Dos animais positivos para o helicobacter spp, 26 (23.2) apresentavam úlceras na pars esophagea e 24 (21.4) apresentavam a mucosa sem alterações. Dos 124 (52.5) animais negativos, 50 (40.3) foram classificados como grau 2 ou 3 e 74 (59.7) como grau 0 ou 1. A análise estatística revelou que não há diferença significativa entre suínos com ou sem lesões gástricas em relação á presença de helicobacter spp, gênero e peso da carcaça

The aim of this study was to investigate the association between the lesions of the gastric mucosa inslaughter pigs and sex, carcass weight and presence of Helicobacter spp. Stomachs from 236 swinewere examined. Gastroesophageal lesions were classified in agreement severity in grade 0, 1, 2 and 3.Fragments from the aglandular and glandular area were processed for histology and for identification ofHelicobacter spp in tissue sections. Macroscopic analysis revealed 203 (86.1%) stomachs with somedegree of lesion. Grade 2 and 3 lesions were observed in 104 (44.1%) animals. Grade 3 lesions wereobserved in 25 (21.1%) castrated males and 20 (16.5%) females. The average carcass weight of animalswith grade 0 and 1 lesions and grade 2 and 3 was 82,5 Kg and 79,5 Kg, respectively. One hundred andtwelve (47.5%) pigs were positive for Helicobacter spp. by Warthin-Starry stain method ; among them,54 (48.2%) had grade 2 and 3 lesions; and 58 (51.8%) had grade 0 and 1 lesions. One hundred and twenty-four (52.5%) were negative for Helicobacter spp; among them 50 (40.3%) had grade 2 and 3 lesions, and74 (59.7%) had grade 0 and 1. There was no significant difference between pigs with and without gastriclesions in regard to the presence of Helicobacter spp, sex and weight

Encefalomielite congênita em bezerro associada ao Neospora caninum no estado do Paraná, Brasil / Encephalomyelitis in a calf associated with the protozoan Neospora caninum in the Parana State, Brazil

Um bezerro da raça Jersey, macho, de 21 dias de vida, com opistótono, apatia e paresia de membros posteriores, desde o nascimento, foi encaminhado ao Hospital veterinário da Universidade Estadual de Londrina, Paraná-Brasil, para avaliação. Após a eutanásia o bezerro foi submetido à necropsia e fragmentos de córtex cerebral, da região cervical da medula espinhal, coração, fígado e pulmão foram colhidos para exames histológicos e virológicos. nenhum agente viral foi isolado nos tecidos do bezerro. No exame histológico foram observados cistos de protozoários ovóides e circulares de diversos tamanhos no cérebro e medula espinhal. Estes cistos mostraram reação positiva na imunoistoquímica (IHQ) para o N. caninum e também para o T.gondii. Amostras de soros colhidas da mãe do bezerro também apresentaram sorologia positiva para N. caninum, T. gondii, BHV-1 e VBVD. Os resultados da sorologia materna, da IHQ, os achados histopatológicos e sinais clínicos que o bezerro apresentava sugerem o envolvimento do Neospora caninum no caso. Este é o primeiro relato de neosporose congênita em bezerro no Estado do Paraná-Brasil.

A 21 days old Jersey male calf showing neurological signals was examined by the Pathology EmergencyService of Veterinary Hospital of State University of Londrina, Parana, Brazil. After the euthanasia thecalf was submitted to the necropsy and fragments of cerebral cortex, cervical area of the spinal marrow,heart, liver and lung were picked for histological exams and virus isolation. No viral agent was isolatedfrom the processed tissues of the calf. The histological exams revealed several ovoid and spherical cysts ofprotozoan in the brain and spinal marrow. These cysts showed positive reaction in the immunohistochemical(IHQ) for the N. caninum and also for T. gondii. Sera samples of the calf mother's also presented positiveserology for N. caninum, T. gondii, BHV-1 and VBVD. The results of the maternal serology, IHQ, histopathologyand clinical signs that the calf presented suggest the involvement of the N. caninum in the case. This is thefirst report of congenital neosporose in calf in the state of Paraná-Brazil

Criptococose no sistema nervoso de cães - relato de três casos / Cryptococcosis in nervous system of drugs - report of three cases

A criptococose é uma micose sistêmica oportunista causada pela levedura Cryptococcus neoformans. A infecção em cães ocorre mais comumente pela inalação de leveduras ou esporos. As alterações neurológicas encontradas são muito semelhantes a outras doenças inflamatórias e infecciosas do sistema nervoso. O objetivo do presente trabalho é relatar três casos de criptococose no sistema nervoso de cães, ressaltando a importância desta doença no diagnóstico diferencial de alterações neurológicas progresivas ou multifocais associadas ou nåo a alterações sistêmicas. O diagnóstico só pode ser confirmado através de cultura fúngica e/ou visualização do agente após coloração adequada do líquor, ou sorologia, quando disponível.

Leptospires detection in kidney, liver and uterus of cows slaughtered in Paraná State, Brazil

O objetivo deste trabalho foi detectar leptospiras em fragmentos de rim, fígado e útero de 96 fêmeas bovinas com histórico sanitário desconhecido, escolhidas aleatoriamente durante o abate em um frigorífico no Estado do Paraná, Brasil. Todas as 96 amostras de urina foram submetidas ao exame direto em microscópio de campo escuro. As amostras positivas neste exame e todos os fragmentos de rim, fígado e útero foram semeados nos meios de cultura EMJH modificado e Tween 80/40/LH. Os cortes histológicos de rim, fígado e útero foram submetidos à coloração de Hematoxilina-Eosina (HE) e a prova de imunoperoxidase indireta com soros hiperimunes contra o sorovar Hardjo (Hardjoprajitno) e contra a estirpe Londrina (LO14), do sorovar Canicola, isolada no norte do Paraná, Brasil, utilizados como anticorpo primário. O exame direto detectou leptospiras na urina de quatro animais. Todas as tentativas de isolamento das urinas e fragmentos de rim, fígado e útero foram negativas após 16 semanas de incubação. No exame histopatológico foi observado infiltrado focal de células mononucleares no interstício renal da maioria dos animais. Na prova de imunoperoxidase indireta com o soro hiperimune contra a estirpe LO14, o rim de um animal foi o único a apresentar resultado positivo. Todos os fragmentos de rim, fígado e útero testados com o soro hiperimune contra o sorovar Hardjo foram negativos.

Leptospirosis in slaughtered sows: serological and histopathological investigation

Swine leptospirosis is recognized world wide as an important cause of reproductive failure. Serum and histo-pathological examinations have been constantly used to diagnose this disease. This study was carried out on slaughtered sows from Northern Paraná State to compare serum findings with kidney, liver, ovary and uterus histo-pathological examinations. The microscopic serum-agglutination carried out on 36 animals detected 24 with titles > 100 and 12 negative (< 100). The histopathological examinations made on livers, kidneys, ovaries and uterus stained with hematoxylin-eosin, were carried out on 16 randomly chosen animals, 11 from the groups with > 100 serological titles and five from the negative group. The results showed that all the 16 animals had indicative lesions in the liver or in one of the kidneys. There were no lesions in the ovaries or uterus. Microscopic serum-agglutination title readings between 20 and 80 were detected in animals of the group considered negative with title < 100.

Ocorrência de enteropatia proliferativa em suínos abatidos no Paraná / Occurrence of proliferative enteropathy in swine slaughtered on the Paraná state

A enteropatia proliferativa dos suínos agrupa diversas patologias com aspectos macroscópicos diferentes: adenomatose intestinal, ileíte regional, enterite necrótica e enteropatia proliferativa hemorrágica. Estudou-se a ocorrência de enteropatia proliferativa em suínos abatidos no estado do Paraná, onde foram colhidas amostras de duodeno, jejuno, íleo, cólon e linfonodo mesentérico de 389 animais. As amostras foram obtidas em três frigoríficos do estado, sendo um na regiäo Norte, um na regiäo Sudeste e um na regiäo Sudoeste. Do total de animais, 12 foram positivos, o que representa 3,08 por cento. A única forma da doença encontrada foi a adenomatose intestinal. O diagnóstico foi caracterizado pelas alteraçöes histopatológicas provocadas pelo agente no trato intestinal afetado.